Fotofrino II ir ciklofosfamido poveikio embrionams lyginamieji tyrimai

Transcription

1 MOKSLO DARBAI SCIENTIFIC PAPERS Laboratorinë medicina. 2011, t. 13, Nr. 3(51), p Fotofrino II ir ciklofosfamido poveikio embrionams lyginamieji tyrimai Violeta Þalgevièienë 1 Danutë Bulotienë 2 Maþena Vasilevska 2 Vytautas Kulvietis 2, 3 Janina Didþiapetrienë 4, 5 Rièardas Rotomskis 2, 3 1 Vilniaus universiteto Medicinos fakulteto Anatomijos, histologijos ir antropologijos katedra Anatomy, Histology and Anthropology Department, Faculty of Medicine,Vilnius University 2 Vilniaus universiteto Onkologijos instituto Biomedicininës fizikos laboratorija Biomedical Physics Laboratory of Institute of Oncology, Vilnius University 3 Vilniaus universiteto Lazeriniø tyrimø centro Biofotonikos grupë Biophotonics Group of Laser Research Center, Vilnius University 4 Vilniaus universiteto Onkologijos instituto Moksliniø tyrimø centras Scientific Research Center of Institute of Oncology, Vilnius University Santrauka Ávadas. Mûsø ankstesniø spektroskopiniø tyrimø duomenimis, foto - vais to fo to fri no kau pi ma sis emb rio ne pri klau so nuo emb rio ge ne zës sta - di jos. At si þvel giant á tai, kad fo to vais to kau pi ma sis emb rio ne ga li tu rë ti ne igia mos áta kos emb rio no vys ty mui si, ðio dar bo tiks las pa ly gin ti fo to - fri no II ir cik lo fos fa mi do, ku rio emb rio tok si nës ir te ra to ge ni nës sa vy bës yra þi no mos, emb rio tok si ná ir te ra to ge ni ná po vei ká þiur kiø emb rio nams. Ty ri mø me dþia ga ir me to dai. Eks pe ri men tams at lik ti pa nau do - tos 22 Wis tar li ni jos bal to sios vai kin gos þiur kës ir 192 emb rio nai. Vai - kingoms þiurkëms ðeðtà ir tryliktà embriogenezës parà buvo suðvirkðta 15 mg/kg fo to fri no II (I gru pë), 15 mg/kg cik lo fos fa mi do (II gru pë) ir fi zio - lo gi nio tir pa lo (kon tro li në III gru pë). Emb rio tok si nis fo to fri no II ir cik lo - fos fa mi do po vei kis ver tin tas pa gal im plan ta ci jø, re zorb ci jø ir emb rio nø skai èiø, kû no svo rio ir emb rio nø il gio po ky èius, te ra to ge ni nis po vei kis pa gal emb rio nø ap si gi mi mø po bû dá. Re zul ta tai. Eks pe ri men ti nio ty ri mo duo me nys pa ro dë, kad fo to fri - nas II tu ri ne di de lá emb rio tok si ná po vei ká ðeð tà pa rà (kri ti niu emb rio no im plan ta ci jos lai ku, kai ne su si for ma vu si pla cen ta, ap sau gan ti emb rio - nà nuo tok si niø me dþia gø pa te ki mo): dël fo to vais to po vei kio nu sta ty ta 8 % re zorb ci jø, o dël cik lo fos fa mi do po vei kio 62 %. Tai ro do, kad fo to - vais to emb rio tok si nis po vei kis yra daug ma þes nis nei cik lo fos fa mi do. Try lik tà pa rà nei fo to fri nas II, nei cik lo fos fa mi das, ver ti nant jø emb rio - tok sið ku mà pa gal emb rio nø re zorb ci jas, to kio po vei kio ne tu rë jo. Tai ro - do, kad ti ria mø vais tø emb rio tok si nis po vei kis pri klau so nuo emb rio ge - ne zës sta di jos. Fo to fri no II ir cik lo fos fa mi do po vei ká emb rio nø vys ty mui - si taip pat ro do jø kû no svo rio ir il gio po ky èiai. Emb rio nai dël ti ria mø vaistø poveikio buvo maþesni ir trumpesni, palyginti su kontrolinës gru - pës svo riu ir il giu. Sta tis tið kai reikð min go skir tu mo tarp mi në tø pa ra - met rø ávai riais emb rio ge ne zës lai ko tar piais ne nu sta ty ta. Mû sø eks pe ri - men to sà ly go mis fo to fri no II te ra to ge ni nis po vei kis ne pa si reið kë, o cik lo - fos fa mi das pa si þy mi te ra to ge ni në mis sa vy bë mis. Iðvados. Fo to fri no II tok si nis po vei kis emb rio nams yra ge ro kai ma - þes nis nei cik lo fos fa mi do, ta èiau re mian tis gau tais re zul ta tais fo to fri - no II ne pa ta ria ma skir ti nëð èioms mo te rims. Reikð mi niai þo dþiai: embriotoksiðkumas, teratogeniðkumas, vaikin - gos þiurkës, fotovaistas, citostatikas. 5 Vilniaus universiteto Medicinos fakulteto Vidaus ligø, ðeimos medicinos ir onkologijos klinika Faculty of Medicine, Vilnius University El. paðtas: janina.didziapetriene@vuoi.lt ÁVADAS Fotosensibilizatoriaus (fotovaisto) su - sikaupimas navike yra pagrindinis fo - to sen si bi li za ci nës na vi kø te ra pi jos (FNT) veiks nys. Gy dant ðiuo me to du fotovaisto suleidþiama á organizmà (á venà, arterijà, duodamas per skrandá, aerozolio pavidalu patenka á kvëpavi - mo takus), jis iðneðiojamas po visà or - LABORATORINË MEDICINA 2011, t. 13, Nr. 3(51) 143

2 Violeta Þalgevièienë, Danutë Bulotienë, Maþena Vasilevska, Vytautas Kulvietis, Janina Didþiapetrienë, Rièardas Rotomskis ganizmà ir jame pasiskirsto. Dël foto - vais to sa vy biø kaup tis na vi ki nia me audi ny je FNT yra tai ko ma on ko lo gi jo - je, ypaè gy dant ne di de lius na vi kus ir na vi kus, esan èius ða lia gy vy bið kai svarbiø audiniø. Fotovaistas yra suþa - dinamas tam tikro bangos ilgio ðviesa. Su þa din tas fo to vais tas pra de da bio - chemi nes re ak ci jas, dël ku riø po vei kio navikinës làstelës þûva [1]. La bai svar bi bet ku rio vais to sa vy - bë yra jo minimalus nepageidaujamas poveikis visam organizmui. Klinikiniø FNT tyrimø rezultatai patvirtino me - to do veiks min gu mà ir sau gu mà. Da - bar ðis metodas leistas taikyti kelioli - ko je ða liø (Ka na da, JAV, Ja po ni ja, Norvegija, Vokietija, Airija ir kt.) ávai - riø lokalizacijø navikams gydyti [2 5]. Metodas ádiegtas á klinikinæ praktikà ir Lie tu vo je [6]. At si þvel giant á tai, kad FNT yra gana saugus metodas (pagrindinis ne - pageidaujamas fotovaisto poveikis pa - sireiðkia padidëjusiu jautrumu ðvie - sai), neatmetama galimybë taikyti ðá metodà ir nëðèioms moterims. Paþy - më ti na, kad li te ra tû ros duo me nø apie fotovaistø poveiká embrionams labai maþai. Yang ir bendraautoriai raðo, kad, deðimtà embriogenezës parà su - ðvirkðtus þiurkëms fotovaisto pirmta - ko 5-aminolevulino rûgðties ir pavei - kus fotoaktyvuojanèia ðviesa, sukelia - mos embrionø rezorbcijos [7]. Oftal - mologijos klinikoje atlikti tyrimai ski - riant tre èià emb rio ge ne zës sa vai tæ fo - to vais to ve te por fi no nëð èioms mo te - rims, serganèioms patologine trumparegyste. Kà tik gimusiems kûdikiams bei 28 mënesiø sulaukusiems vaikams ne igia mo fo to vais to po vei kio ne nu sta - tyta [8]. Mûsø ankstesniø spektrosko - pi niø ty ri mø duo me ni mis, fo to vais tas fotofri nas II kau pia si emb rio ne tuo - met, kai organizmas nëra suformavæs apsauginio placentos barjero, tad ðio fotovaisto kaupimasis priklauso nuo embriogenezës stadijos. Tyrimais nu - staty ta, kad in ten sy vi fo to fri no II fluo - res cen ci ja fik suo ja ma sep tin tà emb - riogenezës parà gimdoje ir vaisiuje, dar ne sant pla cen tos, ku ri ap sau go vaisiø jo formavimosi metu. Detalesni tyrimai parodë, kad fotovaisto kaupi - masis embrione yra nulemtas placentinio barjero [9, 10]. DAR BO TIKS LAS Ðio dar bo tiks las palyginti fotofri - no II ir cik lo fos fa mi do emb rio tok si ná ir teratogeniná poveiká þiurkiø embrio - nams ir ávertinti embriotoksinio ir te - ra to ge ni nio po vei kio pri klau so my bæ nuo vaikingumo paros. Ciklofosfami - das pasirinktas kaip kontrolinis pre - pa ra tas, nes ðio vais ti nio pre pa ra to nuo vë þio embriotoksinës ir teratogeninës savybës literatûroje plaèiai ap - raðytos [11 15]. TY RI MØ ME DÞIA GA IR ME TO DAI Eks pe ri men tams at lik ti pa nau do tos 22 Wistar li ni jos bal to sios þiur kës, sve rian èios g, ir 192 emb rio - nai. Þiur kës gau tos ið La bo ra to ri niø gy vû nø vei si mo, au gi mo ir ty ri mo cen - tro (Vals ty bi nio moks li niø ty ri mø ins - ti tu to Ino va ty vios me di ci nos cen tras). Gau tas Lie tu vos Res pub li kos vals ty - bi nës mais to ir ve te ri na ri jos tar ny bos lei di mas Nr (ið duo tas ) at lik ti la bo ra to ri nius ban dy mus su gy vû nais. Pa te lës nak - èiai bu vo pa lie ka mos su pa ti nais. Pra - ëjus 12 va lan dø ið þiur kës makð ties bu vo pa ima mas te pi në lis ir mik ro sko - pu nu sta to ma est ra li nio cik lo est ru so sta di ja bei ieð ko ma sper ma to zoi dø. Die na, kai pa te lës makð ties te pi në ly je ras ta sper ma to zoi dø, lai ko ma nu li ne emb rio ge ne zës pa ra [16]. Vai kin gos þiur kës bu vo skirs to mos á tris gru pes: I gru pës þiur këms ðeð tà ir try lik tà emb rio ge ne zës pa rà bu vo su ðvirkð ta fo to fri no II (Ax can Phar ma Inc., Ka - na da), do zë 15 mg/kg (do zë nau do ja - ma na vi ki niø li gø kli ni ki niam gy dy - mui); II gru pës þiur këms mi në to mis emb rio ge ne zës die no mis su ðvirkð ta cik lo fos fa mi do (Bax ter On co l o gy GmGH, Vo kie ti ja), do zë 15 mg/kg; kon tro li nës III gru pës þiur këms kse - no bio ti kø ne ðvirkð ta. Kiek vie nà gru - pæ su da rë nuo tri jø iki ðe ðiø vai kin gø þiur kiø, ku rios bu vo lai ky tos vie no do - mis sà ly go mis, mai tin tos ir gir dy tos ápras tu re þi mu. Dvi de ðim tà jà vai kin - gu mo pa rà þiur këms at lik ta eu ta na zi - ja (kiek vie nai þiur kei su ðvirkð ta po 0,5 ml ka lip so lio) ir at ver ta pil vo ert - më. Ið ëmus gim dà bu vo skai èiuo tas im plan ta ci jø, re zorb ci jø ir emb rio nø skai èius. Ið gim dos ið im ti emb rio nai sver ti bei ma tuo ti jø il giai kra nio kau - da li ne kryp ti mi. Vëliau embrionai buvo fiksuoti Bu - e no tir pale (formalino, soèiosios pikrino ir ledinës acto rûgðties miðinys) iðori nëms ir vi daus or ga nø ydoms nu sta - tyti. Fotofrino II ir ciklofosfamido teratogeniná poveiká analizavome Bueno tirpalu fiksuotuose embrionuose stereoskopiniu mikroskopu. Kiekybiniai kintamieji pateikti vi - durkio ir standartinio nuokrypio iðraiðka. Pasirinktas statistinio reikðmin gu mo lyg muo p<0,05 (Stju den to t-testas). REZULTATAI Eksperimentiniai fotofrino II ir ciklo - fos fa mi do po vei kio emb rio ge ne zei duomenys pateikti lentelëje. Embriotoksinis fotofrino II ir ciklofosfamido poveikis vertintas pagal implantacijø, re zorb ci jø ir emb rio nø skai èiø. Im - plantacijø skaièius, skaièiuojant vie - nai þiur kei, gru pë se svy ra vo nuo 8 iki 12. Santykinis rezorbcijø ir embrionø skaièius vertintas atsiþvelgiant á ben - drà implantacijø skaièiø kiekvienoje grupëje. Ið lentelëje pateiktø duomenø matyti, kad ðeðtà embriogenezës parà rezorbcijos dël fotofrino II povei - kio su da rë tik 8 %, o dël cik lo fos fa mi do poveikio 62 %; kontrolinëje grupëje rezorbcijø nekonstatuota. Dël fotofrino II poveikio tryliktà embriogenezës parà rezorbcijø nenustatyta, embrionø skai èius su ta po su im plan ta ci jø skaièiumi, kaip ir kontrolinëje grupë - je; gy vû nø, ku riems try lik tà emb rio ge - nezës parà á pilvo ertmæ suðvirkðta 15 mg/kg cik lo fos fa mi do, re zorb ci ja ávyko tik vienu atveju. Ðio atvejo nebû - tø galima sieti su ciklofosfamido po - veikiu, nes rezorbcija ávyko ankstyvuoju embriogenezës periodu, kai gy - vûnams ciklofosfamido dar nebuvo su - ðvirkðta. Todël ði rezorbcija vertinama kaip at si tik ti në. Gau ti duo me nys ro - do, kad ðeðtà embriogenezës parà cik - lo fos fa mi das yra tok sið kes nis, pa ly - ginti su fotofrino II embriotoksiniu poveikiu, o tryliktà embriogenezës parà mûsø eksperimento sàlygomis skirtumo tarp tiriamøjø vaistiniø preparatø embriotoksiðkumo nenustatyta. Taigi fotofrino II ir ciklofosfamido toksinis po vei kis emb rio nams pri klau so nuo Len te lë. Fotofrino II ir ciklofosfamido poveikis embriogenezei Table. The effect of photofrin II and cyclophosphamide on embryogenesis Embriogenezës para Vaistinis preparatas Implantaci - jø skai èius Rezorbcijos Embrionai skaièius % skaièius % 6 fotofrinas II cik lo fos fa mi das fotofrinas II cik lo fos fa mi das Kon tro li në gru pë LABORATORINË MEDICINA 2011, t. 13, Nr. 3(51)

3 Fotofrino II ir ciklofosfamido poveikio embrionams lyginamieji tyrimai embriogenezës stadijos: didesnis po - veikis placentos formavimosi pradþio - je (ðeðta embriogenezës para) ir maþes nis, kai pla cen ta su si for ma vu si (trylik ta emb rio ge ne zës pa ra). Toksiná vaistiniø preparatø povei - ká emb rio nams taip pat liu di ja jø kû no svorio ir ilgio pokyèiai. Pirmajame paveiks le pa teik ti duo me nys ro do, kad emb rio nai, ku riems su ðvirkð ta fo to - vaisto ar ciklofosfamido, svërë daug ma þiau ir bu vo trum pes ni, pa ly gin ti su kon tro li nës gru pës emb rio nais (p<0,05). Paveikus vaikingas þiurkes ðeð tà pa rà cik lo fos fa mi du, vi du ti nis emb rio no svo ris sie kë tik 2,7 g, fo to - vaistu 2,8 g, o kontrolinëje grupëje buvo 5,0 g. Dël cik lo fos fa mi do po vei kio emb rio nø kû no svo ris tu rë jo ten den ci - jà ma þë ti la biau nei dël fo to fri no II po - veikio. Statistiðkai reikðmingo skirtu - mo tarp vaistø poveikio skirtingomis embriogenezës stadijomis nenustatyta (1 pav.). Te ra to ge ni nio fo to fri no II ir cik lo - fos fa mi do po vei kio ana li zë pa ro dë, kad embrionø vystymosi ydos nustatytos gyvûnams, kuriems ðeðtà vaikingumo parà ðvirkðta tik ciklofosfamido (2 pav.). Paþymëtina, kad ðeðtà emb - riogenezës parà vystymosi sutrikimø tu rë jo tik 3 % emb rio nø. Dau giau emb rio nø vys ty mo si ydø nu sta ty ta, kai ciklofosfamidas buvo ðvirkðtas tryliktà embriogenezës parà 54 % visø emb rio nø. Pa grin di nës emb rio nø for - mavimosi ydos buvo ávairios smegenø anomalijos, neiðsivysèiusios akys, per maþai pirðtø ar jie nevienodo dydþio, A Embrionø svoris, g B Embrionø ilgis, cm 1 pav. Embrionø svorio (A) ir ilgio (B) vidurkiai paveikus juos fotofrinu II ir cik - lo fos fa mi du 6-àjà ir 13-àjà embriogenezës paromis Fig. 1. Em bryo weight (A) and body length (B) av er ages af ter ef fect ing by photofrin II and cyclophosphamide on the 6 th and 13 th day of ges ta tion 2 pav. 20 embriogenezës paros þiurkiø embrionai po 15 mg/kg dozës ciklofosfamido poveikio A kontrolinis embrionas; B: a smegenø iðvarþa, b sutrumpëjæs apatinis þandikaulis, c nesusiformavæ priekiniø galûniø pirðtai; C pil vo organø iðvarþa Fig. 2. Rat em bryos af ter ef fect ing by cyclophosphamide (15 mg/kg dose) on 20 th day of ges ta tion A con trol, B: a ce re bral herniation, b the short en ing of the lower jaw, c oligodactyly, C intra-ab dom i nal her nia LABORATORINË MEDICINA 2011, t. 13, Nr. 3(51) 145

4 Violeta Þalgevièienë, Danutë Bulotienë, Maþena Vasilevska, Vytautas Kulvietis, Janina Didþiapetrienë, Rièardas Rotomskis nesuaugusi pilvo siena ir kt. (2 pav.). Embrionø formavimosi ydø, atsiradusiø dël fo to fri no II po vei kio ðvirkð èiant já tiek ðeðtà, tiek tryliktà vaikingumo parà, kaip ir kon tro li në je gru pë je, ne - nustatyta. REZULTATØ APTARIMAS Mû sø anks tes niø eks pe ri men tø re zul - tatai parodë, kad fotovaistas fotofri - nas II, su leis tas á or ga niz mà, pa si - skirsto audiniuose ir patenka á emb - rio nà: sep tin tà emb rio ge ne zës pa rà, kai placenta dar nesusiformavusi, fo - to vais to emb rio ne su si kau pia dau - giau sia, o ki to mis emb rio ge ne zës pa - romis konstatuotas didelis jo kaupi - masis gimdoje ir placentoje [9]. Kitø au to riø duo me nø apie fo to vais tø kau - pimàsi embrionuose mums prieinamo - je lite ra tû ro je ne ra do me. Tai gi ðio dar - bo tikslas buvo eksperimentuojant su þiur kë mis ið tir ti fo to fri no II emb rio - toksines ir teratogenines savybes ir palyginti jas su ciklofosfamido, kurio toksinis poveikis embrionams árody - tas, atitinkamomis savybëmis. Mûsø gauti duomenys rodo, kad ðeðtà emb - rio ge ne zës pa rà (pla cen tos for ma vi - mosi pradþia) buvo pavieniø rezorbcijø, kurios galëjo bûti sukeltos fotofri - no II po vei kio (nors ir men ko) emb rio - nams. Juolab kad ðeðta embriogene - zës para yra jautriausia ksenobiotikø po vei kiui, dël to nu sta ty tas stip rus emb rio tok si nis cil ko fos fa mi do po vei - kis, o ðis vais tas, kaip jau bu vo mi në ta, átrauk tas á ty ri mà kaip kon tro li nis, pasiþymintis embriotoksiniu ir terato - geniniu poveikiu [11 15]. Paþymëtina, kad tryliktà embriogenezës parà tiria - møjø vaistiniø preparatø embriotok - si nio po vei kio ne ap tik ta, nes su si for - mavusi placenta veikia kaip selektyvus filtras ir apsaugo nuo ksenobioti - kø kau pi mo si emb rio ne bei jø tok si nio po vei kio. Þa lin gà fo to fri no II ir cik lo fos fa mi - do po vei ká emb rio nams ro do emb rio nø kûno svoris ir ilgis. Mûsø tyrimo duo - menimis, jie yra maþesni, palyginti su kon tro li niø emb rio nø kû no svo riu ir il - giu. Statistiðkai reikðmingo skirtumo tarp fo to fri no II ir cik lo fos fa mi do po - veikio embrionø kûno svoriui ir ilgiui nerasta. Kaip jau bu vo mi në ta, yra duo me - nø apie te ra to ge ni ná cik lo fos fa mi do poveiká [12, 14, 15]. Lygindami fotofri - no II ir cik lo fos fa mi do te ra to ge ni ná po - vei ká emb rio nams, fo to vais to te ra to ge - ninio po vei kio ne nu sta të me, o cik lo - fosfamidas sukëlë embrionø vystymo - si ydø: ávairias smegenø anomalijas, pilvo organø iðvarþas ir kt. Embrionø þûtá bei jø raidos sutrikimus sukelia ávai rios che mi nës struk tû ros ir pri - gim ties vais ti niai pre pa ra tai. Ryð - kiausias embriotoksinis ir teratogeni - nis jø po vei kis es ti penk tà að tun tà embriogenezës parà (kritinis implan - ta ci jos lai kas) bei de ðim tà t ry lik tà emb rio genezës parà (placentos formavi ma sis ir ak ty vi or ga no ge ne zë) [17 22]. Mûsø atlikto eksperimentinio tyrimo rezultatai rodo stiprø teratoge - ni ná cik lo fos fa mi do po vei ká ak ty vios or ga no genezës metu (tryliktoji para). Paþymëtina, kad mes nustatëme ir to - kiø emb rio nø vys ty mo si ydø, ku rios nebuvo apraðytos kitø tyrëjø. Tarp to - kiø ydø yra ne vie no do dy dþio gal vos sme ge nø pus ru tu liai, anof ta mi ja (në - ra vienos ar abiejø akiø), oligodaktilija (ið si vys të ne vi si pirð tai). At si þvel - giant á tai, kad fo to fri nas II tu ri ne di - delá embriotoksiná poveiká bei neigia - mai vei kia emb rio nø svo rá ir il gá, ið lie - ka tikimybë, kad didesnë fotovaisto do zë ga li turëti teratogeniná poveiká. Ðiame straipsnyje pateikiami nau - ji duomenys apie fotovaisto fotofrino II potencialø embriotoksiná poveiká: nu - statytos pavienës rezorbcijos embrionø implantacijos laikotarpiu bei emb - rionø kûno svorio ir ilgio parametrø su ma þë ji mas, pa ly gin ti su ana lo gið - kais kon tro li niø emb rio nø pa ra met - rais, bei papildyti literatûros duome - nys apie embriotoksiná ir teratogeniná cik lo fos famido poveiká. IÐVADOS Summary 1. Fotofrinas II, suleistas 15 mg/kg do ze ðeðtà embriogenezës parà, sukë lë pavienes þiurkiø embrionø re - zorbcijas ir pakenkë embrionø for - mavimuisi. Tai rodo nedidelá embriotoksiná ðio vaistinio preparato poveiká kritiniu implantacijos laiko tar piu. 2. Ir fotofrino II, ir ciklofosfamido þalingas poveikis priklauso nuo embrio ge ne zës sta di jos: emb rio nai jautriausi tirtø vaistiniø prepara - tø poveikiui ðeðtà embriogenezës parà, kai dar nesusidaræs biologi - nis medþiagø pernaðos barjeras placenta. 3. Potencialus fotofrino II embriotoksinis poveikis yra gerokai silpnes - nis negu onkologijos klinikoje var - tojamo ávairiø lokalizacijø piktybi - niams navikams gydyti ciklofosfa - mido poveikis. 4. Fotofrino II teratogeninio poveikio mûsø eksperimento sàlygomis ne - nustatyta. Tyrimai turëtø bûti tæ - siami. PRAK TI NË RE KO MEN DA CI JA Atsiþvelgiant á ankstesniø mûsø tyri - mø re zul ta tus, ro dan èius, kad fo to fri - nas II kau pia si emb rio ne [9], bei ðia me straips ny je pa tei kia mus duo me nis apie galimà þalingà fotofrino II poveiká emb rio nø vys ty mui si, ðio fo to vais to ne pa ta ria ma skir ti nëð èioms mo te - rims. Padëka Ðá darbà finansuoja Lietuvos mokslo taryba pagal mokslininkø iniciatyva vyk do mà moks lo ti ria mà já dar bà Nanodaleliø pasiskirstymas organiz - me, pra si skver bi mas pro pla cen tos bar je rà ir po vei kis emb rio nui (Nr. MIP ). Gauta: Priimta spaudai: COMPARATIVE STUDY OF THE EFFECTS OF PHOTOFRIN II AND CYCLOPHOSPHAMIDE ON EMBRYOS Violeta Þalgevièienë, Danutë Bulotienë, Maþena Vasilevska, Vytautas Kulvietis, Janina Didþiapetrienë, Rièardas Rotomskis In tro duc tion. Our pre vi ous spec tro - scopic stud ies showed that photofrin II ac cu mu lates in em bryo. Whereas, ac cu - mu lat ing of photosensitiser in em bryos may have a neg a tive ef fect on em bryo de - vel op ment, the aim of this work com - pare photofrin II and cyclo phospha mide (which embrytoxic and terato genic char - ac ter is tics are known) embry toxic and teratogenic effects on rat embryos. Ma te rial and meth ods. To make an ex per i ment there were used 22 Wistar al - bino preg nant rats and 192 em bryos. On 6th and 13 th day of embryo genesis photofrin II (I group) with 15 mg/kg dose, cyclophosphamide with dose 15 mg/kg (II group) and sa line (III group con trol) were in jected to preg nant rats. Embryo - toxic ef fect was as sessed by num ber of im plan ta tions, resorptions and live em - bryos, and by em bryos weight and body length changes; teratogenic ef fect by embryonic malformations character. Re sults. Our re sults showed that photofrin II has slight embryotoxic ef fect on 6 th day of embryogenesis (crit i cal pe - riod of im plan ta tion): due to photo sensi ti - ser s ef fect there were 8% of resorptions 146 LABORATORINË MEDICINA 2011, t. 13, Nr. 3(51)

5 Fotofrino II ir ciklofosfamido poveikio embrionams lyginamieji tyrimai while due to cyclo phosphamide ef fect 62%. This shows that embryotoxicity of photosensitiser is sig nif i cantly lower than embryo toxicity of cyclo phos - phamide. On the 13 th day nei ther photo - frin II nor cyclo phosphamide had such ef - fect (eval u at ing embryotoxicity by num - ber of re sorp tions). This shows that embryo toxic ef fect of those med i cines de - pends on embryogenesis stage. Ef fect of photofrin II and cyclo phos - phamide on em bry onic de vel op ment is shown by changes in weight and body length of em bryos. Due to ef fect of these med i cines em bryos were smaller and shorter in com par i son with their weight and body length in con trol group. There was no significant difference between men - tioned pa ram e ters in dif fer ent pe ri ods of embryo genesis. In our ex per i men tal con di - tions tera to ge nici ty of photo frin II did n t ap pear while tera to ge nici ty of cyclo - phosphamide did. Conclusions. The tox ic ity of photo - frin II on em bryos is sig nif i cantly lower than tox ic ity of cyclo phos phamide. On the ba sis of the re sults photofrin II is not rec om mended for preg nant women. Keywords: embryotoxicity, tera to ge nici - ty, preg nant rat, fotosensitiser, cyto - static. LITERATÛRA 1. Rotomskis R, Streckytë G, Griciûtë L. Fo to sen si bi li zuo ta navikø terapija: pir - mi niai vyksmai. Vilnius: Lietuvos moks las, 2002; p Dougherty TJ. An up date on photo - dynamic ther apy ap pli ca tions. J Clin La ser Med Surg 2002; 20(1): Mitton D, Ackroyd R. A brief over view of photo dynamic ther apy in Eu rope. Photodiagnosis Photodyn Ther 2008; 5(2): Zhao B, He YY. Re cent ad vances in the pre ven tion and treat ment of skin can - cer us ing photodynamic ther apy. Ex - pert Rev Anticancer Ther 2010; 10(11): Davila ML. Photodynamic ther apy. Gastrointest Endosc Clin N Am 2011; 21(1): Bloznelytë-Plëðnienë L, Rut kovs kie - në L. Photodynamic ther apy of ma lig - nant and pre can cer ous tu mours in Lith u a nia. Acta Medica Lithuanica 2007; 14: Yang JZ, Van Vugt DA, Melchior MF, Hahn PM, Reid RL. Photodynamic ab - la tion of early preg nancy in the rat with 5-aminolevulinic acid: a po ten tial new ther apy for tubal ectopic preg - nancy in the hu man. Fertil Steril 1994; 62(5): De Santis M, Carducci B, De Santis L, Lucchese A, Straface G. First case of post-con cep tion Verteporfin ex po sure: pregnancy and neonatal outcome. Acta Ophthalmol Scand 2004; 82(5): Graþelienë G, Þalgevièienë V, Di dþia - pet rie në J, Þukienë J, Sukackaitë A, Le ge nis V, Rotomskis R. Fotovaisto pa - si skirs ty mas þiurkës ir embriono au di - niuo se (spektroskopinis tyrimas). Me - di ci na (Kaunas) 2006; 42(2): Þalgevièienë V, Rotomskis R, Gra þe lie - në G, Didþiapetrienë J, Legenis V, Su - kac kai të A, Þukienë J. Ac cu mu la tion of photodrug in rat em bryos, pla centa and amniotic sac. In: Proccedings of the in - ter na tional con fer ence Tis sue Bi ol ogy VI ded i cated to the 200 th anniversary of the opening of Old Anatomical Theatre. Tartu, Es to nia 2005; p Spielmann H, Eibs HG, Merker HJ. Ef - fects of cyclophosphamide treat ment be fore im plan ta tion on the de vel op - ment of rat em bryos af ter im plan ta - tion. J Embryol Exp Morphol 1977; 41: Hales BF. Com par i son of the mutagenicity and tera to ge nici ty of cyclophosphamide and its ac tive me - tab o lites, 4-hydroxycyclophosphamide, phosphoramide mus tard, and acrolein. Can cer Res 1982; 42(8): Sato M, Shiozawa K, Uesugi T, Hiromatsu R, Fukuda M, Kitaura K, et al. Col lab o ra tive work on eval u a tion of ovar ian tox ic ity. 7) Ef fects of 2- or 4- week re peated dose stud ies and fer til - ity study of cyclophosphamide in fe - male rats. J Toxicol Sci 2009; 34(Suppl 1): SP Xiao R, Yu HL, Zhao HF, Liang J, Feng JF, Wang W. De vel op men tal neurotoxicity role of cyclophosphamide on post-neu ral tube clo sure of ro dents in vi tro and in vivo. Int J Dev Neurosci 2007; 25(8): Ozollins TR. Cyclophosphamide and the Teratology So ci ety: an awk ward mar riage. Birth De fects Res B Dev Reprod Toxicol 2010; 89(4): Svendsen O, Han J. Hand book of lab o - ra tory an i mal sci ence. Third edi tion. 1994; p Giavini E, Lemonica IP, Lou Y, Broccia ML, Prati M. In duc tion of micronuclei and toxic ef fects in em - bryos of preg nant rats treated be fore im plan ta tion with anticancer drugs: cyclophosphamide, cis-plat i num, adriamycin. Teratog Carcinog Mutagen 1990; 10(5): Graillet C, Pagano G, Gi rard JP. Stage- spe cific ef fects of teratogens on sea ur chin embryogenesis. Teratog Carcinog Mutagen 1993; 13(1): Menegola E, Broccia ML, Renzo FD. Teratogenic ef fects of Doxorubicin in rats at midgestation and at term. Teratog Carcinog Mutagen 2001; 21(4): Þalgevièienë V, Þukienë J, Gra þe lie - në G, Sinkevièiûtë G, Didþiapetrienë J. Embryotoxicity and tera to ge nici ty of some de riv a tives of chloro ethyl amino - phenyl acetic acid. Pathol Oncol Res 1998; 4(1): Slapðytë G, Didþiapetrienë J, Gra þe lie - në G, Morkûnas V, Þalgevièienë V. Ef - fects of so dium sel e nite against adriamycin- in duced embryotoxicity and genotoxicity in rats. Trace Elem Elec tro lytes 2006; 23(2): Þalgevièienë V, Graþelienë G, Þu kie - në J, Didþiapetrienë J. The ef fect of -car o tene against adriamycin tox ic ity on the em bryo for ma tion. Medicina (Kaunas) 2011; 47(1): LABORATORINË MEDICINA 2011, t. 13, Nr. 3(51) 147